SN∕T 3306.16-2021 国境口岸环介导恒温扩增（LAMP)检测方法 第16部分：寨卡病毒
|
ID： |
24136FDDE92044A2960BA42E6E3837B7 |
|
文件大小(MB)： |
0.32 |
|
页数： |
10 |
|
文件格式： |
|
|
日期： |
2021-10-24 |
|
购买： |
文本摘录（文本识别可能有误，但文件阅览显示及打印正常，pdf文件可进行文字搜索定位）：
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准,SN/T 3306.16—2021,中华人民共和国海关总署发 布,ICS 11. 020,CCS C 62,2021-06-18发布2022-01-01实施,国境口岸环介导恒 温扩增（LAMP） 检测方法 第16部分：寨卡病毒,Loop-mediated isothermal amplification detection method at frontier port,Part16: Zika Virus,I,SN/T 3306.16—2021,前 言,本部分按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的,规定起草,本文件是SN/T 3306《国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）检测方法》的第16 部分。SN/T 3306 已,经发布了以下部分：,——第1 部分：鼠疫杆菌；,——第2 部分：产毒素霍乱弧菌；,——第3 部分：志贺氏菌；,——第4 部分：嗜肺军团菌；,——第5 部分：布鲁氏菌；,——第6 部分：黄热病毒；,——第7 部分：猴痘病毒；,——第8 部分：基孔肯雅病毒；,——第9 部分：结核分枝杆菌；,——第10 部分：炭疽芽孢杆菌；,——第11 部分：副溶血性弧菌；,——第12 部分：空肠弯曲菌；,——第13 部分：疟原虫；,——第14 部分：大肠杆菌O157:H7；,——第15 部分：沙门氏菌；,——第16 部分：寨卡病毒,——第17 部分：包虫,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任,本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口,本文件起草单位：烟台国际旅行卫生保健中心、天津国际旅行卫生保健中心、中国科学检验检,疫科学研究院、甘肃国际旅行卫生保健中心、北京蓝谱生物科技有限公司,本文件主要起草人：钟响、刘宁、高娟娟、左锋、韩辉、刘鹏、王颖、方绍庆、王莉、米佳,1,SN/T 3306.16—2021,国境口岸环介导恒温扩增（LAMP）,检测方法 第16 部分：寨卡病毒,1 范围,本文件规定了国境口岸寨卡病毒的环介导恒温扩增（LAMP）检测方法,本文件适用于国境口岸出入境人员血液、尿液、唾液等及埃及伊蚊、白蚊伊蚊携带寨卡病毒的,筛查检测,2 规范性引用文件,下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用,文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）,租用于本文件,GB 19489 实验室生物安全通用要素,SN/T 4652.2 国境口岸寨卡病毒病防控技术规范 第2 部分：标本采集和处理方式,SN/T 4652.3 国境口岸寨卡病毒病防控技术规范 第3 部分：实验室检测,病原微生物实验室生物安全管理条例（中华人民共和国国务院令第424号）,3 缩略语,下列缩略语适用于本文件,RNA：核糖核酸（ribonucleic acid）,DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）,dNTP：脱氧核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate）,EDTA：乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetra acetic acid）,LAMP：环介导恒温扩增（loop-mediated isothermal amplification）,4 生物安全措施及防污染措施,寨卡病毒在我国归属于三类病原微生物，应在生物安全二级实验室（BSL-2）开展实验室检测,应按照《病原微生物实验室生物安全管理条例》等相关规定要求，做好生物安全防护工作,LAMP 扩增灵敏度高使得其更容易污染导致假阳性，因此应高度重视扩增产物的污染问题，反应,过程中和反应完成后应避免开盖。加样过程应在生物安全柜进行，加样顺序为：阴性对照、样本、阳,性对照，切勿打乱顺序，否则易出现假阳性。废弃物处理应符合GB 19489 中的规定,5 技术概要,根据寨卡病毒的NS5 基因序列设计内、外引物及环状引物，识别靶序列上的8 个独立区域，利用,Bst DNA 聚合酶启动循环链置换反应，在特异性基因序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而,复始形成有很多环的花椰菜结构的茎- 环DNA 混合物，同时从dNTP 析出大量焦磷酸根离子。添加的,2,SN/T 3306.16—2021,钙黄绿素显色剂初始与锰离子结合处于荧光淬灭状态，随着反应的进行，焦磷酸根离子夺去结合的锰,离子，钙黄绿素恢复从而发出绿色荧光，进而与反应液中的镁离子结合使荧光增强,6 试剂和材料,6.1 引物：根据寨卡病毒特有的NS5 基因（见附录A）设计一套特异性引物、包括外引物1、外引物,2、内引物1、内引物2 和环状引物1、环状引物2,外引物1（F3，5’-3’）：GCAGAGCAATGGATGGGATA,外引物2（B3，5’-3’）：CCCATCCTTGAGGTACAGCT,内引物1（FIP，5’-3’）：AAGAACCTGAGGGCATGTGCAAGACTCAAACGAATGGCGGT,内引物2（BIP，5’-3’）：CACAGGAGTGGAAACCCTCGACTGAAGTGGTGGGAGCAGA,环状引物1（LF，5’-3’）：CACAACGCAGTCATCTCCAC,环状引物2（LB，5’-3’）：TGGAGCAATTGGGAAGAAGTCC,6.2 核算提取试剂盒：QIAamp Viral RNA Kit1）或市售等效产品,6.3 Bst DNA聚合酶和AMV逆转录酶：均为8 U/μL,6.4 2×Ther……
……